Kolomchromatografie is een veelgebruikte methode voor het scheiden en zuiveren van mengsels van chemische verbindingen. De instrumentatie van kolomchromatografie omvat verschillende sleutelcomponenten die een effectieve scheiding garanderen. Hier is een overzicht van de instrumentatie:
1. Kolom
Materiaal:Meestal gemaakt van glas, roestvrij staal of plastic.
Maat:Varieert op basis van de schaal van de chromatografie (analytisch, preparatief of industrieel).
Verpakt met:Stationaire fase (bijvoorbeeld silicagel, aluminiumoxide of hars).
Frits of filter:Voorkomt dat de stationaire fase de kolom verlaat met de mobiele fase.
2. Stationaire fase
Samenstelling:Vast materiaal met specifieke adsorptie-eigenschappen.
Soorten:Silicagel, aluminiumoxide of gefunctionaliseerde harsen (bijv. ionenuitwisselings- of affiniteitsmaterialen).
3. Mobiele fase
Oplosmiddel of oplosmiddelmengsel:Draagt het monster door de stationaire fase.
Soorten:Niet-polair (bijvoorbeeld hexaan), polair (bijvoorbeeld methanol, water) of een polariteitsgradiënt.
4. Monsterinjector
Wordt gebruikt om het monstermengsel op de kolom te brengen.
Dit kan een handmatige injectie zijn of een geautomatiseerd systeem voor nauwkeurige controle.
5. Pomp (optioneel)
Zorgt voor een consistente stroom van de mobiele fase.
Gebruikt bij hoogwaardige vloeistofchromatografie (HPLC) of wanneer nauwkeurige controle van de stroming nodig is.
6. Detector (optioneel)
Identificeert en kwantificeert gescheiden componenten in realtime terwijl ze uit de kolom elueren.
Voorbeelden zijn onder meer:
UV-Vis-spectrofotometer
Fluorescentiedetector
Massaspectrometer (MS)
Brekingsindex (RI)-detector
7. Fractiecollector
Verzamelt de gescheiden fracties van verbindingen terwijl ze uit de kolom elueren.
Mogelijk inclusief automatische verzameling op basis van tijd of detectorsignaal.
8. Data-acquisitiesysteem (optioneel)
Registreert en analyseert gegevens van de detector.
Genereert chromatogrammen die het scheidingsproces weergeven.
9. Accessoires
Drukregelaars:Voorkom overdruk.
Thermostaten of verwarmingen:Controleer indien nodig de kolomtemperatuur.
Kleppen:Beheer de stroom van mobiele fase en monster.
Voor eenvoudigere opstellingen (bijvoorbeeld kolomchromatografie op basis van zwaartekracht) zijn pompen, detectoren en geautomatiseerde systemen mogelijk niet nodig. In plaats daarvan drijven zwaartekracht- of lagedruksystemen de mobiele fase door de stationaire fase.